啪啪免费网站,一级毛片在线看,91入口,不卡av中文字幕手机看

產(chǎn)品中心PRODUCTS CENTER
技術(shù)文章您現(xiàn)在的位置:首頁 > 技術(shù)文章 > 漩渦振蕩器在土壤微生物中提取總DNA并純化應(yīng)用

漩渦振蕩器在土壤微生物中提取總DNA并純化應(yīng)用

更新時(shí)間:2013-09-25   點(diǎn)擊次數(shù):4234次

實(shí)驗(yàn)概要


從土壤微生物中提取總DNA并純化,高質(zhì)量的DNA可用于后續(xù)文庫構(gòu)建。


主要試劑


TENP緩沖液(50 mmol/L Tris, 20 mmol/L EDTA, 100 mmol/L NaCl, 1% PVP, pH 10.0)

PBS緩沖液(137 mmol/L NaCl, 2.7 mmol/L KCl, 10 mmol/L Na2HPO4, 2 mmol/L KH2PO4, pH 7.4)

DNA提取緩沖液(100 mmol/L Tris, 100 mmol/L EDTA, 100 mmol/L Na3PO4, 1.5 M NaCl, 1%CTAB, pH 8.0)

蛋白酶K(25 mg/mL)

溶菌酶(50 mg/mL, pH 8. 0)

20% SDS

氯仿

異戊醇

異丙醇

70%乙醇

RNAse 20 mg/mL

QIAXⅡ大片段凝膠回收試劑盒(Qiagen)


主要設(shè)備


50mL、1.5 mL離心管

搖床

高速離心機(jī)

水浴鍋

電泳槽

電泳儀

MixMax漩渦振蕩器


實(shí)驗(yàn)材料


土壤樣品


實(shí)驗(yàn)步驟


1. 總DNA提取:

    (1) 取2 g土樣,置于50mL滅菌的離心管中;

    (2) 加入10 mL TENP緩沖液(50 mmol/L Tris, 20 mmol/L EDTA, 100 mmol/L NaCl, 1% PVP, pH 10.0)懸浮土樣,200轉(zhuǎn)搖床振蕩10min充分混勻;

    (3) 10 000 r/min離心5 min,棄上清,重復(fù)洗滌多次至上清基本為無色;

    (4) 用5 mL PBS緩沖液(137 mmol/L NaCl, 2.7 mmol/L KCl, 10 mmol/L Na2HPO4, 2 mmol/L KH2PO4, pH 7.4)漂洗一次;

    (5) 沉淀加入13.5 mL DNA提取緩沖液(100 mmol/L Tris, 100 mmol/L EDTA, 100 mmol/L Na3PO4, 1.5 M NaCl, 1%CTAB, pH 8.0),混勻后加入100 μL蛋白酶K(25 mg/mL)和200 μL溶菌酶(50 mg/mL, pH 8. 0),37℃水浴30 min,每隔10 min顛倒混勻;

    (6) 加入2 mL 20% SDS,65℃水浴2 h,每隔20 min顛倒混勻;

    (7) 8 000 r/min室溫離心15 min,取上清,用等體積氯仿:異戊醇(24:1)抽提一次;

    (8) 水相中加入0.6倍體積的異丙醇,4℃沉淀一夜;

    (9) 11 000 r/min 4℃離心20 min收集DNA沉淀;

    (10) 70%乙醇漂洗兩次,干燥后用100 μL ddH2O(含RNAse 20 mg/mL)溶解,轉(zhuǎn)入1.5 mL離心管。

2. 總DNA純化:

    (1) 配制0.8%瓊脂糖凝膠;

    (2) 每個(gè)上樣孔加入50 μL粗DNA,進(jìn)行低電壓長時(shí)間電泳(4℃, 25 V, 8 h);

    (3) 電泳結(jié)束后,切下主帶所在的凝膠(膠的體積盡可能小);

QIAXⅡ大片段凝膠回收試劑盒(Qiagen)回收:加入3倍體積的Buffer QXⅠ及適量的QIAXⅡ(Glassmilk),55℃溫浴10 min,每隔2 min輕輕用手指彈起沉淀(回收大片段時(shí)不要渦旋),待凝膠*溶解,12 000 g離心1 min,棄上清;再加入500 μL Buffer QXⅠ洗滌沉淀1次以消除剩余凝膠;再用500 μL Buffer PE洗滌沉淀2次,將沉淀晾干,加入適當(dāng)體積的ddH2O,離心后收集上清,瓊脂糖凝膠電泳確定回收效率。


 

皖公網(wǎng)安備 34010402701421號

国产日韩欧美一级| 碟调噜噜噜麻豆| 久久综合亚州色| 天天操天天干天天日| JJ久久久久久人妻| 女人天堂AⅤ| 人气日韩高清无码一区| 亚洲综合无码一区二区| 精品女同视频第一页| 潮安县| 青青草老司机| 97夫妻网| 男人j放进女人p全黄动态图 | 无码人妻久久久一区二区三区| www.国产777| 欧美日韩视频在线网| 激情图片六月丁香| 伊人尤物| 神马影院一区二区三区| 国产偷自在线| 香蕉视频一直看一直爽| 日本熟女不卡视频| 亚洲无码六月天| 国产乱人伦精品一区二区| 伊人久久2| 人妻中文系列| 伊人麻豆影视| 日本精品| 国产人人视频| 韩日不卡视频| 高清无码不卡一本| 亚洲精品一区久久久久久| 一级黄片久久久| 五月激情综合社区| 色哟哟成人网站| 亚洲伦理久久| 久久一本之道| 精品无码视频在线播放| 国产精品亚洲玖玖玖在线观看| 少妇香蕉| 日韩 欧美 精品|